PCR熒光試劑盒用于檢測動物綠膿桿菌核酸。綠膿桿菌是SPF實(shí)驗(yàn)大、小鼠必須檢測并排除的病原菌之一,因此快速、準(zhǔn)確做好實(shí)驗(yàn)動物綠膿桿菌檢測十分重要。基于SYBR Green I染料法的基本原理,綠膿桿菌特異性引物與變性的DNA分子通過PCR反應(yīng)生成雙鏈DNA,SYBR Green I與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步,通過熒光信號,對PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步?;蛘呤褂脽晒馊玖蟂YBR。SYBR可以結(jié)合到雙鏈DNA上面,當(dāng)體系中的模板被擴(kuò)增時(shí),SYBR可以有效結(jié)合到新合成的雙鏈上面,隨著PCR的進(jìn)行,結(jié)合的SYBR染料越來越多,被儀器檢測到的熒光信號越來越強(qiáng),從而達(dá)到定量的目的。
一般說來,應(yīng)選用口碑較好的經(jīng)過大量客戶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的PCR熒光試劑盒,因?yàn)橹挥羞x對了試劑盒才能夠做成漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來,特別是對于一些珍貴的樣品更不能因?yàn)楣?jié)約一些蠅頭小利而破壞了樣品本身。PCR熒光試劑盒在研發(fā)之初就考慮到了一般科研環(huán)境中方方面面的影響,例如我們就光照強(qiáng)度、光照時(shí)間對本產(chǎn)品的影響做了嚴(yán)苛的實(shí)驗(yàn)論證,得到1ml本產(chǎn)品盛裝于1.5ml離心管中放置在光照強(qiáng)度下可以保存12h,超過12h產(chǎn)品性能則會下降。