西尼羅河檢測試劑經(jīng)CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原,它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學指標,WNRA蛋白是一種重組抗原,它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構成。
該試劑盒是基于兩步夾心法原理。在該測定中,將微量滴定孔與標準品,質控或未知血清樣品孵育??梢詫⒀鍢悠放c孔中添加的樣品稀釋緩沖液直接混合(另請參見以下說明)。洗滌后,將孔用對人IgG特異的抗體處理,并用辣根過氧化物酶(HRP)標記。在第二溫育和洗滌步驟之后,將孔與四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物溫育。
然后加入酸性終止溶液,并通過在450納米處的吸光度測量來確定底物的酶促轉化程度。高于某個閾值時,WNRA和質控孔的吸光度之比可以準確確定是否存在針對WNV的抗體。提供一組陽性和陰性樣品作為內(nèi)部質控,以監(jiān)測試劑盒的完整性。
【西尼羅病毒試劑盒】
1. 微孔板:96孔即用型,每孔均包被結合西尼羅重組抗原的單抗。
2. IgG樣品稀釋液:1×25ml,即用 2-8℃下保存至效期。
3. IgG陰性質控: 1×30ul,2-8℃下保存至效期。要長時間儲存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲存。
4. IgG陽性質控: 1×30ul,2-8℃下保存至效期。要長時間儲存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲存。
5. 洗滌液(10X): 1×120ml,2-8℃下保存至效期。
6. EnWash: 1×20ml, 2-8℃下保存至效期。
7. 酶聯(lián)物: 1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。
8. TMB底物液: 1×9ml,即用型,2-8℃下保存至效期。
9. 終止液: 1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。